實驗收費標準:
項目編號 | 項目名稱 | 計價單位 | 單價 |
ZC1070 | 免疫熒光(單標) | 張 | 60元 |
免疫熒光(單標)服務服務介紹:
熒光免疫組織化學是現代生物學和醫學中廣泛應用的技術之一,免疫熒光技術與形態學技術相結合發展成免疫熒光細胞(或組織)化學。
實驗結果展示:
免疫熒光(單標)服務實驗流程:
冰凍切片免疫熒光實驗步驟
1、 冰凍切片固定:冰凍切片從冰箱拿出來復溫,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
2、 抗原修復:組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液(PH8.0)的修復盒中于微波爐內進行抗原修復。中低火5min,此過程中應防止緩沖液過度蒸發,切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。(修復液和修復強度根據組織來確定)
3、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
4、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發)
5、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
6、 DAPI復染細胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。
7、 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
8、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發波長330-380nm,發射波長420nm;FITC綠光激發波長465-495nm,發射波長515-555 nm;CY3紅光激發波長510-560,發射波長590nm)
石蠟切片免疫熒光實驗步驟
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
2、 抗原修復:組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液(PH9.0)的修復盒中于微波爐內進行抗原修復。中火至沸后斷電間隔10min中低火至沸,此過程中應防止緩沖液過度蒸發,切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。(修復液和修復條件根據組織來確定)
3、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
4、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發)
5、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
6、 DAPI復染細胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。
7、 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
8、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發波長330-380nm,發射波長420nm;FITC綠光激發波長465-495nm,發射波長515-555 nm;CY3紅光激發波長510-560,發射波長590nm)
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