抗熒光衰退封片劑CITIFLUOR™ -(Antifadent Mountant Solutions)
一系列特意為免疫熒光反應封片設計的產品,*的配方使得染料的熒光不再衰退。常用的抗熒光衰退封片劑有AF1、AF2、AF3、AF4、AF87、AF100、AF200、AF300、CFM-1、CFM-2等等。其中部分產品含DAPI,可襯染細胞核或襯染DNA的實驗。
關于抗熒光淬滅劑,常見的三種:酚型的沒食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)、胺型的對苯二胺p-Phenylenediamine (PPD)、胺型的 1,4-Diazabicyclo-octane(DABCO)三乙烯二胺。熒光淬滅的基本理論是這樣滴:組織切片中的普通溶解氧在激發態時變成了單線態氧,單線態氧類似氧自由基,這個東西就是熒光淬滅的主要元兇,我們加入的抗淬滅劑主要是與這個元兇反應,直接清除單線態氧。注意,封片劑中加入抗淬滅劑,往往在激發的初級階段使熒光總量降低,還有與DNA結合染料反應的風險??纯催@三種試劑的優缺點吧:PPD可以與花菁染料反應(尤其Cy2),故這類染料封片考慮不用含PPD的封片劑;NPG,無毒,活細胞熒光染色這類封片劑,但是NPG對細胞凋亡的過程有所干涉,進行此類研究的同學多注意啦,盡量避開含有NPG的封片劑;DABCO不像PPD那樣有效且毒性低,可以用于活細胞,但是與NPG一樣,對細胞凋亡的過程有所干涉。
大量的封片劑堆砌在這里,怎樣快速的找到自己需要的那個呢?簡單的思路是:
*步,凝固型還是非凝固型?凝固起來貯存和拿取很方便,要考慮的是凝固過程中組織片的收縮以及需要脫水步驟的收縮。非凝固型需要考慮的是封片劑的揮發和側漏,當然需要蓋玻片啦(有時還需要硅膠密封墊spacer),而且往往蓋玻片還需要密封起來,常用指甲油、牙科蠟、VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在蓋玻片周圍涂一下,指甲油干固所需時間較長,有污染鏡頭的風險;牙科蠟在常溫拿下能較快固化;VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在活細胞封固中很常用。
第二步:需要甘油基(水溶性)的還是非甘油基(脂溶性)的?甘油可以與任何比例的水混溶,可以與乙醇相溶,但不與油混溶。知道這些,選擇起來就簡單多了。你的組化反應體系是怎樣的?含水,就選甘油基(水溶性的)的。經過嚴格脫水處理,就選非甘油基的(油溶性的)。
第三步、封片劑的折射率。染色的片子用封片劑選擇折射率在1.52至1.54之間透明度佳;未染色組織用有很高或很低折光率的封片劑封固,這樣的封片劑可以消除球面相差,獲得佳的圖像。
介紹用到的成膜劑:
聚乙.烯醇poly (vinyl alcohol):有機高分子物質,無毒,可溶于水,常用的一種成膜劑。根據其聚合度和醇解度的不同編為不同的號碼,例如Mowiol® 4-88。PVA也可以加入其他物質或者反應進行改性處理, 例如Permafix-1就是改性的PVA。
聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)簡稱PVP,是一種非離子型高分子化合物,也是常用的成膜劑。
甘油基 | 非甘油基 | |
非凝固型 | AF1 CFM-1+Antifadent AF1+DAPI CFM-1 AF2 CFM-2 AF4 CFMR-2 AFP1 CFM-3 | AF3 AFR3 AF87 |
凝固型 | AF200+Tris MWL 4-88 AF300+Tris MWL 4-88 AF200+CFPVOH AF300++CFPVOH | PVP+Antifadent(折射率1.5) CFPVOH+Antifadent CFPVOH+AF100 PF+AF100 |
產品選購指南:
l AF1:基本成分是甘油、PBS緩沖液、抗熒光淬滅劑、其它成分等,折射率1.46,PH10左右,適于用于檢測浸泡在甘油中的組織切片、死細胞、 FISH (including CARD-FISH)等的封片。
l AF2:基本成分是甘油、抗熒光淬滅劑、其它成分等,沒有自身的緩沖液。折射率1.47,該產品的優勢在沒有自身緩沖液,可以與任意其它緩沖液相容。
l AF3:基本成分是PBS緩沖液、抗熒光淬滅劑、其它成分,折射率1.34,對于活細胞檢測特別適用。
l AFR3: 基本成分是PBS緩沖液、一種型的抗熒光淬滅劑(非胺非酚型)、其他成分等。
l AF4:又稱Glycerol/n-propyl gallate mounting medium封片劑,添加的抗熒光衰退劑是沒食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)。
l AF87:特別的地方是含有無熒光浸油,這是為在高倍鏡下觀察特別設計的封片劑,對于DAPI染色特別有用(DAPI 在甘油基封片劑中有疏散的傾向)。
l AF100:基本成分是PBS緩沖液、抗熒光衰退劑、其他成分等,這是一款不含甘油的封片劑,需要與CFPVOH溶液配套使用。需要預先混合AF100和CFPVOH溶液,用多少混合多少,混合后10小時內用完。該封片劑的折射率1.34-1.35.
l AF200:與AF100類同,不同的是,AF200是甘油基的,胺基型抗熒光衰退劑,適于花青素、Alexa、Hoeches等封片。
l AF300:與AF100類同,不同的是,AF300是甘油基的,酚基型抗熒光衰退劑。
l CFM系列的封片劑的折射率均是1.52,等于或者近似等于所用載片和蓋片玻璃的折射率,這對圖像的獲得很有幫助。主要于激光共聚焦顯微鏡下使用,或者高倍鏡需要浸油的情況下來替代浸油。CFM-1的pH約6.5,.CFM-1 Plus Antifadent的PH值大約10, CFM-2的pH of約~8.5,CFM-3的PH值接近中性。
訂購信息:
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
17970-25 | CitiFluor™ AF1 | 25 ml |
17970-125 | CitiFluor™ AF1+DAPI | 15ml |
17971-25 | CitiFluor™ AF2 | 25 ml |
17972-25 | CitiFluor™ AF3 | 25 ml |
17973-10 | CitiFluor™ AFR3 | 10ml |
17973-25 | CitiFluor™ AF4 | 25ml |
17976-10 | CitiFluor™ AF87 | 10 ml |
17977-10 | CitiFluor™ AF200 | 10ml |
17977-25 | CitiFluor™ AF300 | 10ml |
17977-50 | CitiFluor™ PVP-1 | 25ml |
17977-100 | CitiFluor™ PVP-1+antifadent | 25ml |
17977-150 | CitiFluor™ MWL4-88 | 25ml |
17978-35 | Set of CitiFluor™ CFPVOH and AF100 | 25 ml+ 5 ml |
17980-10 | CitiFluor™ CFM-1 | 10ml |
17981-10 | CitiFluor™ CFM-1+antifadent | 10ml |
17982-10 | CitiFluor™ CFM-2 | 10ml |
17979-10 | CitiFluor™ CFMR-2 | 10ml |
17979-20 | CitiFluor™ CFM-3 | 10ml |
17979-50 | CitiFluor™ PF | 10ml |
抗熒光衰退封片劑CITIFLUOR™